Sent: Saturday, September 29, 2001 10:01 AM
Subject: new D4 mimic is OK! 不再怕DNA contamination
Dr. Hong:
 
The test of new primer for DRD4 is O.K.
因為用架橋式的設計, primer 橫跨eoxn 3 and 4, 不必再擔心 DNA contamination.
(見附加圖片 new primer of D4)(Hong: 在冰操作 PCR reagents and polymerase 可以大大地減少 primer dimers)
New mimic is also down yesterday, and the result is satisfactory. :-)
(見附加圖片New D4 mimic 確定size)
 
拜託請幫我將此段 D4 mimic合成plasmid並用OD定量, 玉里目前無法做到.
 
等你同意後, 我會寄上 New mimic 的PCR product(10^10copies/ul), new primer以及 protocol.
只換了一條primer, 所以, 另一條北榮lab裡有.
 
因為我們向拜瑪仕訂的primer有三管, 要不要我乾脆寄一管乾粉, 如果北榮後續有再用到的可能的話.
這條primer有一好處也是壞處, 只移動了幾個bp, 所以PCR product size與原先的差不了多少.(170bp左右)
New mimic也是, size與原先的一模一樣(因為懶得換, 設計黏在erb上的同一位置). (295bp)
上次去拿的合成mimic primer有用到一條, 因為少order一條而省了上千元. 十分感謝!!
 
這件事我獲得一個教訓.
當初我在台北開始做這實驗時, 就該設計現在這種primer, 而不該偷懶(或因節省)的因素而沿用舊的primer. 雖然用DNAse Tx 可以解決DNA contamination的困擾, 但是, 多個步驟增加loading, 且有可能增加 RNAse contamination.
我到玉里後, 發現 DNAse 效果不佳且似乎有順帶RNAse進來而使cDNA品質反而下降.
繞了一圈, 還是得把當初沒做的補做回來.
希望提供給大家做個參考.
 
Lai